La Riserva Naturale Monte Rufeno, appartenente al territorio comunale di Acquapendente (Vt), dal 1983 protegge estesi boschi in un paesaggio collinare attraversato dal fiume Paglia. I circa tremila ettari dell'area protetta sono dominati dai querceti misti, oltre a macchia mediterranea e rimboschimenti di conifere.
Al confine con Umbria e Toscana la Riserva, grazie alla particolare collocazione geografica e alle vicende storiche del territorio, ospita flora e fauna molto ricche con specie anche rare.
Sono caratteristici i casali in pietra restaurati con funzione didattica e ricettiva disseminati tra i boschi; vi sono, infine, diversi torrenti, stagni e fontanili che rendono piacevoli le escursioni oltre a favorire flora e fauna in parte esclusiva di questi ambienti.

Il territorio della Riserva è caratterizzato da una morfologia dolce che si inserisce nel tipico paesaggio collinare dell'Alto Lazio e della Toscana meridionale. I rilievi, che raggiungono quote modeste (massima 774 m s.l.m.), digradano verso l'ampia valle del fiume Paglia, che nasce dal Monte Amiata e confluisce nel Tevere, e che divide la Riserva in due settori: quello più grande al cui centro si eleva Monte Rufeno, e l'altro nella zona di Torre Alfina. Numerosi affluenti del Paglia, di carattere torrentizio, attraversano la Riserva o ne delimitano i confini; tra questi il Subissone (nei pressi di Torre Alfina), il Fossatello, il Tirolle e l'Acquachiara.